|
|
The study of fluids and secretions from reproductive tracts of pig (Sus scrofa f. domestica) and cattle (Bos primigenius f. taurus)
Dráb, Tomáš ; Liberda, Jiří (vedoucí práce) ; Jonáková, Věra (oponent) ; Ulčová-Gallová, Zdeňka (oponent)
Protein-sacharidové interakce hrají významnou roli v reprodukci savců, jsou podstatou takových dějů, jako je maturace a vzájemné rozpoznání gamet nebo formování oviduktálního rezervoáru spermií. V mé dizertační práci jsem se zabýval aktivitami glykosidas v folikulární tekutině krávy a prasnice jejich změnami spojenými se zráním folikulu. Detekoval jsem aktivity pěti různých glykosidas v terciálním a preovulačním folikulu u obou druhů. Nejaktivnějšími enzymy byly α-L-fukosidasa v kravské folikulární tekutině a α-D-manosidasa v prasečí. Zároveň aktivita obou těchto enzymů vykazovala největší nárůst během zrání folikulu. Je zajímavé, že právě α-L-fukosa v případě krávy a α- D-manosa v případě prasnice jsou sacharidy, které se důležité pro vznik oviduktálního rezervoáru spermií a aktivita výše zmíněných enzymů se tak nabízí jako hypotetický mechanismus synchronizace uvolňování spermií z jejich oviduktálního rezervoáru s dobou ovulace. Dále jsem ukázal, že aktivita β- D-galaktosidasy a α-D-manosidasy ovlivňují interakci mezi receptory spermií pro zonu pellucida a zonou pellucidou, což může vysvětlit, jak změny zony pellucida spojené s její maturací mohou vést ke snížení polyspermického oplodnění. Abych lépe charakterizoval studované glykosidasy, vyvinul jsem červenou nativní elektroforézu - což je nová...
|
|
|
Protein Rab-2A: jeho lokalizace a funkce v lidských spermiích a fertilizaci
Sadílková, Lucie ; Postlerová, Pavla (vedoucí práce) ; Lánská, Eva (oponent)
Protein Rab-2A patří do Rab rodiny monomerních G-proteinů podílejících se na regulaci intracelulárního vezikulárního transportu. Přestože bylo publikováno několik studií popisující roli proteinu Rab-2A v savčích spermiích, přesná lokalizace ani funkce tohoto proteinu v samčích gametách nebyly dosud plně pochopeny. V předkládané diplomové práci jsme za využití protilátky 5C5, vytvořené Laboratoří reprodukční biologie, jako první popsali přítomnost Rab-2A v lidských spermiích. Protilátkou 5C5 se nám v lyzátu lidských spermií podařilo identifikovat několik izoforem Rab-2A o molekulových hmotnostech 26, 24, 22 a 18 kDa, jejichž identita byla potvrzena analýzou hmotnostní spektrometrie. Rab-2A jsme pomocí metody nepřímé imunofluorescence lokalizovali v oblasti akrozomu ejakulovaných i kapacitovaných spermií, odkud protein v průběhu akrozomální reakce odchází. Dále jsme zjistili sníženou hladinu proteinu Rab-2A u spermií od pacientů s různými patologiemi ejakulátu. Na základě studií popisující roli Rab-2A v biogenezi akrozomu a přítomnost Rab-2A v perinukleární théce býčích spermií, jsme se pokusili o detekci Rab-2A v této proteinové vrstvě také u lidských spermií. Zvolená metoda však zřejmě není využitelná pro lidské spermie a izolace se nezdařila. Dále jsme prokázali přítomnost Rab-2A v sekrečních...
|
|
|
Akrozomální reakce savčí spermie
Picková, Jana ; Frolíková, Michaela (vedoucí práce) ; Kuntová, Barbora (oponent)
K akrozomální reakci (AR) spermie dochází in vivo v reprodukčním traktu samice a tento děj je nezbytnou prerekvizitou k tomu, aby spermie mohla oplodnit vajíčko. AR umožňuje spermii proniknout obaly vajíčka a splynout s ním. Spermie musí nejdříve projít procesem kapacitace a teprve poté může dojít k iniciaci AR a vylití akrozomálního obsahu. Co je induktorem AR není stále zcela jasné, důležitou roli hrají nejspíše extracelulární obaly vajíčka - zona pellucida a kumulární buňky vylučující progesteron a jiné látky, u nichž byla prokázána schopnost AR iniciovat. V poslední době je předmětem intenzivního studia identifikace místa iniciace AR v rámci reprodukčního traktu samice. Ukázalo se, že u myší podstoupí většina spermií AR v horním isthmu. V ampule se pak nachází jen malé množství spermií a všechny tyto spermie jsou schopné vajíčko oplodnit. Během AR dochází k uvolňování akrozomálního obsahu do extracelulárního prostředí. Nejdříve dochází k uvolnění rozpustné složky akrozomu a až poté je postupně uvolněna akrozomální matrix. Před vylitím obsahu akrozomu musí dojít přes receptory spřažené s G proteiny a receptory tyrosinkinázy k aktivaci fosfolipáz. Poté, co jsou aktivovány i proteinkinázy, dochází k aktivaci kanálů na akrozomu i na plazmatické membráně spermie a uvolnění Ca2+ . Dále jsou...
|
|
|
The study of fluids and secretions from reproductive tracts of pig (Sus scrofa f. domestica) and cattle (Bos primigenius f. taurus)
Dráb, Tomáš ; Liberda, Jiří (vedoucí práce) ; Jonáková, Věra (oponent) ; Ulčová-Gallová, Zdeňka (oponent)
Protein-sacharidové interakce hrají významnou roli v reprodukci savců, jsou podstatou takových dějů, jako je maturace a vzájemné rozpoznání gamet nebo formování oviduktálního rezervoáru spermií. V mé dizertační práci jsem se zabýval aktivitami glykosidas v folikulární tekutině krávy a prasnice jejich změnami spojenými se zráním folikulu. Detekoval jsem aktivity pěti různých glykosidas v terciálním a preovulačním folikulu u obou druhů. Nejaktivnějšími enzymy byly α-L-fukosidasa v kravské folikulární tekutině a α-D-manosidasa v prasečí. Zároveň aktivita obou těchto enzymů vykazovala největší nárůst během zrání folikulu. Je zajímavé, že právě α-L-fukosa v případě krávy a α- D-manosa v případě prasnice jsou sacharidy, které se důležité pro vznik oviduktálního rezervoáru spermií a aktivita výše zmíněných enzymů se tak nabízí jako hypotetický mechanismus synchronizace uvolňování spermií z jejich oviduktálního rezervoáru s dobou ovulace. Dále jsem ukázal, že aktivita β- D-galaktosidasy a α-D-manosidasy ovlivňují interakci mezi receptory spermií pro zonu pellucida a zonou pellucidou, což může vysvětlit, jak změny zony pellucida spojené s její maturací mohou vést ke snížení polyspermického oplodnění. Abych lépe charakterizoval studované glykosidasy, vyvinul jsem červenou nativní elektroforézu - což je nová...
|
|
|
Biochemické parametry zony pellucidy prasečích oocytů během folikulogeneze
Vildová, Denisa
Polyspermické oplození je jedním z hlavních problémů při in vitro fertilizaci prasečích oocytů. Zona pellucida je extracelulární matrix, která obklopuje rostoucí savčí oocyty a je zodpovědná za polyspermický blok po oplození. Prasečí zona pellucida je tvořena třemi glykoproteiny označovanými jako ZP2, ZP3 a ZP4. Tato práce se zabývá modifikacemi ZP3 proteinu u oocytů s různou vývojovou kompetencí. Nebyl zjištěn žádný statistický průkazný rozdíl v expresi ZP3 proteinu u oocytů s nižší vývojovou kompetencí (velikost folikulů S), ve srovnání s oocyty s vyšší vývojovou kompetencí (velikost folikulů M). Byl však zjištěn statisticky průkazný rozdíl v acidifikaci ZP3 proteinu nezralých oocytů pocházejících z folikulů o velikosti S, ve srovnání s oocyty pocházejícími z folikulů o velikosti M. Navíc byl pomocí metody Western blot detekován band v oblasti > 50 kDa, který by mohl mít zásadní roli během fertilizace oocytů.
|
|
|
Panel of monoclonal antibodies – alternative tool For monitoring of sperm–zona pellucida receptors localization and identification
Zigo, Michal ; Dorosh, Andriy ; Pohlová, Alžběta ; Jonáková, Věra ; Šulc, Miroslav ; Maňásková-Postlerová, Pavla
Primary binding of the sperm to the zona pellucida (ZP) is one of the many steps necessary for successful fertilization in all sexually reproducing species. Sperm bind ZP by means of membrane receptors which recognize carbohydrate moieties on ZP glycoproteins according to a well-precised sequential process. Primary-binding receptors are localized throughout the acrosomal region of the sperm surface of which many have been disclosed in various mammals. For the monitoring sperm-zona pellucida receptors in terms of localization and characterization - panel of monoclonal antibodies against proteins from the sperm surface was prepared. Antibodies were screened by immunofluorescence and Western blotting for protein localizations and competence of antibodies, respectively. Antibodies recognizing proteins localized on the sperm head and simultaneously detected by Western blot were further studied by means of immunolocalization in reproductive tissues and fluids, binding to ZP, immunoprecipitation and protein identification using MS analysis. Out of 17 prepared antibodies, 8 antibodies were simultaneously recognizing proteins localized on the sperm head and detecting proteins of interest by Western blotting. Further only 3 antibodies recognized proteins which also coincided in binding to ZP. These 3 antibodies were used for immunoprecipitation, and further protein identification of immunoprecipitates revealed that the antibodies distinguish acrosin precursor, RAB2A protein, and lactadherin P47. Acrosin and lactadherin P47 have been already detected on the sperm surface and their physiological functions in reproduction have been proposed. To our knowledge, this is the first time RAB2A has been found on the surface of sperm and its physiological function in the process of fertilization remains undisclosed.
|
|
| |
host ::
RSS.